2-戊酮酸置于ammonium Hydroxide,葡萄糖,Glucose Dehydrogenase From Bacillus Megaterium,Acinetobacter Tandoii Glutamate Dehydrogenase,还原型辅酶ⅰ体系中,用 Aq. Buffer 作为反应溶剂,化学反应生成 Dl-正缬氨酸
参考文献:谭氏不动杆菌谷氨酸脱氢酶通过生物催化级联反应不对称合成l-高丙氨酸的合理工程
标题:谭氏不动杆菌谷氨酸脱氢酶通过生物催化级联反应不对称合成l-高丙氨酸的合理工程
摘要:L-高丙氨酸是合成几种手性药物的有用组成部分,通常是通过使用天然氨基酸作为廉价起始反应物的生物级联反应合成的.然而,添加昂贵的外部辅因子和亮氨酸脱氢酶对中间体2-酮丁酸的低效率是工业应用中的两个主要挑战.本文中,鉴定了来自不动杆菌的双辅因子依赖性谷氨酸脱氢酶(at Gludh),当使用全细胞催化时,有助于充分利用辅因子的细胞内池.通过重建酶和底物2-酮丁酸的末端甲基之间的疏水网络,At的严格底物特异性成功地改变了针对α-酮戊二酸的gludh,最有效的突变体(k76L / T180C)获得的活性是野生型蛋白的17.2倍.为了帮助释放传质限制,成功构建了三酶共表达系统.使用1M大号-苏氨酸,这是接近的溶解度极限,我们得到的产率99.9%大号-Homoalanine在仅3.5小时不添加外部辅酶至级联,得到99.9%ee的和29.2克l--1 ħ-1时空产量.此外,的活动设计在朝向其他疏水性氨基酸的gludh也提高了1
DOI:10.1039/d1Cy00376C